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　　1）確定干燥、不含溶劑的待分離混合物的重量。

 

　　2）用薄層色譜選取溶劑體系，使Rf的值處于0.2～0.3之間，但如果混合物復(fù)雜，這可能不現(xiàn)實(shí)。在比較復(fù)雜的情況下，可能需要借助梯度洗脫的方式，簡(jiǎn)單地說，就是在純化洗脫的過程中不斷提高溶劑的極性，該技術(shù)在后面有更加詳盡的介紹。但是在薄層色譜分析中，你必需確定哪種溶劑體系將會(huì)使不同的點(diǎn)樣處于Rf在0.2～0.3的范圍之內(nèi)。

 

　　3）確定用于樣品上柱的方法。你可有三種選擇：凈試樣法，溶液法或硅膠吸附法。

 

　　快速分析柱的構(gòu)造：

　　由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。

 

　　使用：

　　色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

 

　　要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

　　流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。

 

　　流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

 

　　流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。

 

　　流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。

 

　　流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

 

　　在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。